Cisbio激酶、GPCR、代謝、免疫標記試劑HTRF®技術(shù)

HTRF®是均相時間分辨熒光技術(shù)的簡稱，HTRF®技術(shù)是對TR-FRET技術(shù)的進一步改良，提供了更高的靈敏度和穩(wěn)定性，為法國Cisbio公司的zhuanli技術(shù)。

Cisbio Bioassays是一家超過50年歷史的生命科學、醫(yī)療診斷和藥物研發(fā)公司，最初在體外診斷方面的成就提供了豐富的免疫化驗的經(jīng)驗，這方面的經(jīng)驗與Jean-Marie Lehn 教授（1987年諾貝爾化學獎得主）在稀土熒光特性方面研究合作，造就了如今的HTRF技術(shù)。如今，HTRF®在藥物發(fā)現(xiàn)領域成為了*受歡迎的方法之一。*各大制藥企業(yè)、藥物研究所和新藥篩選中心都將HTRF®作為重要的化合物篩選方法進行藥物研發(fā)。

Cisbio Bioassays公司主要提供基于HTRF®技術(shù)的完備整套產(chǎn)品，涉及藥物篩選、疾病診斷、免疫學分析等多個方面，包括激酶、GPCR、代謝、免疫標記試劑等。在*高通量篩選領域（HTS），Cisbio公司占據(jù)了TR-FRET市場的主導份額。

我們北京諾博萊德科技有限公司作為Cisbio Bioassays公司的經(jīng)銷商為客戶提供，正規(guī)進口，貨期穩(wěn)定，折扣好的服務標準。

Cisbio Bioassays公司部分產(chǎn)品簡介：

HTRF®技術(shù)： 免洗的Elisa，傳統(tǒng)Elisa的替代技術(shù)，跟傳統(tǒng)的Elisa有wuyulunbi的優(yōu)勢：

操作非常簡單：空板直接加樣，加完即可檢測。

體系非常穩(wěn)定：7天之內(nèi)可隨時檢測，信號基本不變。

數(shù)據(jù)客觀真實：可有效去除背景熒光，假陽性率、假陰性率低。

HTRF®原理

HTRF®（均相時間分辨熒光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence ）是一種用來檢測純液相體系中待測物的技術(shù)。該技術(shù)結(jié)合了熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET，Fluorescence Resonance Energy Transfer） 和時間分辨熒光 （TRF, Time-Resolved Fluorescence)）兩大技術(shù)。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）

利用兩種熒光基團，分別稱為能量供體（Donor）和能量受體（Acceptor）。在供體和受體相互靠近時，能量從供體轉(zhuǎn)移到受體上，并使后者發(fā)出熒光。

由于受體分子的發(fā)射光來自于能量轉(zhuǎn)移，所以在實驗中無需包被、無需將未結(jié)合與已結(jié)合的分子分開，即無需洗滌步驟。

時間分辨熒光（TRF）

利用稀土元素中鑭系元素的*性質(zhì)，其熒光比普通熒光持續(xù)時間更長。普通熒光的半衰期為納秒級，鑭系元素的半衰期為毫秒級，有6個數(shù)量級的差別。所以在檢測時，TRF有一個時間延遲-50微秒，從而使普通背景熒光信號幾乎為零。因此TRF的背景非常低，反映樣品實際情況。

HTRF®的技術(shù)創(chuàng)新點

HTRF®的能量供體是銪（Eu3+）和鋱（Tb2+）的穴狀化合物（如右圖）。在穴狀化合物里，Eu和Tb被yongjiu地嵌合在一個籠子中，結(jié)構(gòu)非常穩(wěn)定，對溫度、PH值、金屬離子、螯合物等耐受性*。

HTRF®的能量受體為XL665和d2。兩者激發(fā)波長為620 nm，發(fā)射波長為665 nm。XL665是改良過的別藻藍蛋白（APC），其將APC的亞基偶聯(lián)，使其不能解離，增加了穩(wěn)定性。d2是第二代受體，光譜學特征與XL665相同，但分子量較小，約為1KD，可減少空間位阻對實驗的可能影響。

HTRF®的操作步驟

HTRF®的操作步驟非常簡單，只需要將實驗所需試劑加進去，然后孵育、檢測即可

HTRF®的數(shù)據(jù)分析

HTRF®采用了比值法來處理數(shù)據(jù)，可以去除由于溶液通透率、細胞大小、細胞數(shù)量不同引起的誤差。

HTRF®的應用范圍

G蛋白偶聯(lián)受體研究：受體第二信使檢測  受體配體結(jié)合  胞內(nèi)信號分子檢測

激酶活性檢測：胞外激酶活性檢測 胞內(nèi)激酶活性檢測

生物標志物檢測：基于抗體的夾心法和競爭法檢測

抗體檢測：抗體重鏈含量測定、抗體輕鏈含量測定

生物過程分析：GST含量測定、HIS含量測定、CHO宿主蛋白含量測定

免疫過程分析：CD16結(jié)合檢測、CD32結(jié)合檢測、CD64結(jié)合檢測

相互作用分析：蛋白-蛋白、蛋白-多肽、蛋白-DNA、蛋白-RNA

蛋白修飾：蛋白甲基化、蛋白乙酰化、蛋白泛素化、蛋白水解

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